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机械网--谈提高HPLC检测限、溶剂脱气等的几点经

发布时间:2021-11-18 13:20:38 阅读: 来源:珠宝秤厂家
机械网--谈提高HPLC检测限、溶剂脱气等的几点经

  仅针对用反相碳108烷基硅烷化填料的柱子和紫外检测器的HPLC通常在理论教学时,HPLC分析总要求实用HPLC纯的试剂、用孔径比填料粒度小的微孔滤膜过滤活动相、最好用真空或氦气脱气。实际上,依照不同的精确度,有时候其实不需要做得那么严格。这里首先申明,虽然许多做法是我的经验,但请读到这篇文章的朋友自己做个判断,如果按我说的做,造成任何损失,我深表遗憾,但我不承担任何责任。这篇文章仅供交换和讨论。 关于HPLC纯。我想这里关键是两点:纯度高、紫外吸收小。纯度高1方面,没有杂质干扰测定;另外1方面不会有金属离子侵害纯度为99.99%以上的高纯度硅胶基质。但如果你的HPLC分析的是直接用分析纯试剂制备而没有其他色谱纯溶剂稀释步骤而且是中药之类的dirty sample(脏样品);那么用自己重蒸的分析纯溶剂也能够了,固然还有1点是紫外吸收也要同时符合要求。这对黄芩苷1类含量高、紫外吸收大的样品足够了。如果懒得自己重蒸,也能够用些便宜的色谱纯试剂。事实上,据我所知,许多所谓的色谱纯也是国内制备灌国外品牌的瓶子卖的。水嘛,用去离子水就行了,也就是市售的纯水。水的紫外吸收与甲醇、乙腈相比,小得很,主要考虑不要有金属离子和细菌。不过,千万别买了假的纯水。保险做法,找家大的纯水供应点,买水回来,做1下紫外扫描、做下菌检、再来个水硬度检查,行的话就固定用他的。 滤膜过滤,除非是无机盐,否则我均不过滤,定期把前置的过滤头取下,放稀硝酸里清洗,再用纯水洗至中性就行了。能过过滤头的东西就让它过吧,懒得理它,有人可能会考虑梗塞的问题,没等它堵,我的柱子都会坏了,把柱子前面1点挖了,添上新的,就行了,固然这里操作要谨慎。至于长菌,能在甲醇里长,我也没办法了。如果是高压2元梯度泵,用超声脱气就行了。把溶剂瓶放到59kz的超声清洗机超至没有白白的气泡上来就行了。4元的是混合后脱气,比较重要,1般都会配脱气机,我也没用过,不说了。如果是要求检测限很小的分析,有几点建议,首先,如果是等度洗脱违法强拆国家赔偿吗,1定要改成单元等度,即活动相混合到1个瓶子里;第2,尽量用乙腈/水系统洗脱,乙腈紫外吸收小,相同条件下,噪音小很多;在前两样都解决不了,那只好通氦脱气了。梯度洗脱,如果像人参皂苷之类的,尽量用乙腈/水系统洗脱,不行就通氦啰。 做了那么久液相,梗塞流路的事情碰过几次,都是无机盐配的缓冲液惹祸,都不关过滤的事。缓冲液换有机相冲柱时,有人1不注意没冲干净无机盐就冲甲醇,结果就塞了。千万要用90%左右的水先冲干净盐。不锈钢管路堵了好办,烘箱烘之,再冲开。柱子堵了,我还没试过。 其实,做HPLC通常担心的是做不出理想的结果和坏柱子。 理想的结果,主要的就靠流速精确的和检测限。流速精确才能保证保存时间精确,这与机器性能有关,不谈了。检测限越低就等于色谱峰可以的误差可以越小。根据我的经验,2元等度会使噪音峰高大大增加,所以做等度不要用2元,除非,你的样品峰高远远高于噪音(20倍以上吧)。可以的话,使用乙腈自然比甲醇好。空气的存在也会影响噪音,乃至是出鬼峰,还是那句,不行就通氦啰。additives(添加剂)也要注意,看看添加的3乙胺、乙酸之类的截止波长是多少,低于她的截止波长就是不透过,会极大的增大噪音。 噪音是怎样酿成的呢,就是往复泵的脉冲和活动相的基础吸收,用单元泵是为了降落脉冲;用乙腈就是降落基础吸收。物质的紫外吸收系数1般是固定的,降落噪音提高检测限的动身点就是以上两方面了。但是物质在不同的溶剂里多层楼房拆迁补偿标准,紫外吸收系数是不1样的违约强拆承担什么法律费任,有时候添加剂也会影响,特别是酸,乙酸、磷酸、盐酸有时候值得选择1下。保护柱子,就是不要堵了,不要污染。我1般不用保护柱,得不偿失,国内的不能用,国外得太贵。我就两招:用3%乙酸溶液和甲醇2元梯度100%甲醇到10%甲醇,1小时做个来回,柱子耐不了pH10的就用1%乙酸,这东西,降柱压有奇效,目前为止我是百试百灵;另外1招就是挖柱填柱了。资讯分类行业动态帮助文档展会专题报道5金人物商家文章